It basisprinsipe fan DNA-synteze

De gemyske DNA-synteze is basearre op 'e fêste-fasesyntezestrategy en fosforamiditechemie.Oars as de biologyske DNA-synteze, is it materiaal yn gemyske DNA-synteze DMT (4, 4-dimethoxytrityl) en phosphoramidite modifisearre deoxyriboxyside, lykas werjûn yn figuer 1. De DNA-synteze wurdt útfierd op 'e fêste stipe (wy kinne ferskate fan oanbiedeOligo Synthesis Column), dat wol sizze CPG (kontrolearre porie glês) en PS (polystyrene), en de hiele synteze wurdt útfierd op inDNA / RNA synthesizer, dat is ús wichtichste apparatuer, hat ferskillende model lykas: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 en ensfh synteze syklus.In typysk synteze syklus befettet fjouwer stappen, Deprotection, Coupling, Capping en Oxidation (figuer 2).De Deprotection is ynsteld om de DMT-groep op 'e fêste stipe of de 5' hydroxylgroep op' e foarige nucleoside te ferwiderjen, de 3% trichloroacetic acid yn dichloromethane wurdt brûkt as deprotection-reagens.Dan de phosphoramidite wizige deoxyriboxyside waard tastien om bleatstelling hydroxyl groep mei help fan activator, ie 5-ethylthiotetrazole of 4, 5-dicyanoimidazole, it foarmjen fan de phosphitetriester (III), en realisearre de Coupling stap.In Capping-stap wurdt útfierd om de net-reagearre hydroxylgroep te blokkearjen tidens de koppelingsstap, om de formaasje fan net-winske defektsekwinsjes te minimalisearjen.Uteinlik wurdt de ynstabile phosphitetriester (III) oxidearre ta gemysk stabile phosphitetriester (V) mei iod as oksidant yn it oanwêzich fan pyridine.

De synthesized DNA koe wurde cleavage út de fêste stipe troch aminolysis, de 2-cyanoethyl beskerme groep op 'e phosphortriester en it amide op' e nucleobase wurdt cleavaged tagelyk, de synteze platen en synteze kolommen yn rekken wurde pleatst direkt yn 'e reaksje keamer fan deDeprotection Equipment.Crude DNA koe wurde taret troch HPLC, electrophoresis en OPC op fraach, wy kinne ek foarsjen jo deReiniging Equipmentfoar Post-ferwurking.