De nucleic acid synteze wurdt útfierd mei help fan de fêste faze sialyske amide triglyceride metoade, wêrby't it 3'-ein fan it DNA wurdt ymmobilisearre op in fêste faze substraat en nukleotiden wurde tafoege yn 'e 3' oant 5' rjochting oant it winske DNA-fragmint is synthesized .Dit ferskilt fan DNA-synteze troch de tapassing fan DNA-polymerase.
It 3'-ein fan 'e earste basis wurdt immobilisearre op CPG tidens synteze, de 5'-OH fan' e folgjende basis is beskerme mei di-p-tolyl trityl DMT, de aminogroep op 'e basis is beskerme mei benzoic acid en de 3' -OH wurdt dan aktivearre mei in aminofosfaatferbining.1 base fan 'e 5 5'-OH fan 1 base en 3'-OH fan 'e folgjende base foarmje in fosfiettriglyceride, dat dan mei jodium oksidearre wurdt ta in fosfaattriglyceride, it beskermjende middel op 'e twadde basis 5'-OH wurdt fuorthelle troch it tafoegjen fan dichloroacetic acid DM cycles troch de tafoeging fan 'e folgjende basis, en nei synteze wurdt de beskermer op' e 5'-OH fuortsmiten mei in swakke soer. mei konsintrearre ammoniumhydroxide ûnder ferwaarming, wurdt it ammoniumhydroxide fuortsmiten, it fragmint wurdt fakuümdroech, en it nukleinsûre wurdt suvere troch floeistofchromatografy of PAGE.
Stappen fan Oligo Synthesis
Deblokkearjen
De5 ein DMT beskermjende groep wurdt fuortsmiten troch it tafoegjen fan TCA oplossing.
Aktivearring
It mingjen fan de aktivator mei it oligonucleotidemonomeer om it aktive oligonucleotide-monomeer tuskenyn te foarmjen.
Koppeling
De 5-terminale hydroxylgroep reagearret mei it aktive oligonucleotide-tuskenmiddel yn in anty-generative kondensaasjereaksje om in ynstabile fosfittriglyceridebân te foarmjen.
Capping
De tafoeging fan in capping agent fiert in acetylation capping reaksje mei tefolle hydroxyl groepen dy't net belutsen by de kondensaasje reaksje.
Oxidaasje
De tafoeging fan iodoplossing dy't wetter befettet, reagearret mei ynstabile fosfitebindingen troch oksidaasje om stabile phosphoric acid triglyceride obligaasjes te foarmjen.
Cyanoethyl Cleavage
De nucleic acid produkt nei synteze, mei de tafoeging fan DEA oplossing te ferwiderjen de cyanoethyl groep út de fosfaat triglyceride bân.
Kloofd & Untskerming
De nukleïnesûrfragminten wurde ôfsplitst fan 'e fêste faze-drager troch it tafoegjen fan in konsintrearre ammoniumhydroxide-oplossing en dan ferwaarme om de beskermjende groepen te ferwiderjen fan' e wetterstofbindingen fan 'e basen.
Post tiid: Nov-21-2022